產品中心
PRODUCT CENTER
快速HSA/IgG清除試劑盒
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貨號 |
產品名稱 |
規格 |
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BF101 |
BcMag ? 快速HAS和IgG清除試劑盒 |
25 preps |
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BF102 |
BcMag ? 快速HAS和IgG清除試劑盒 |
100 preps |
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產品屬性 |
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組成 |
表面覆蓋有高密度專有化學官能團的磁珠 |
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磁化強度 |
60 EMU/g |
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磁化類型 |
超順磁 |
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有效密度 |
2.5g/ml |
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濃度 |
30 mg/ml (dH2O) |
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綁定容量 |
10ul血清/30ul磁珠 |
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存儲條件 |
收到后保存在4C° |
快速HSA/IgG清除試劑盒
使用我們的快速HSA/IgG清除試劑盒，使用專有磁珠，快速輕松地從血清和血漿樣品中去除白蛋白和IgG。富集和洗脫的蛋白質用于下游應用，例如生物標志物檢測和蛋白質組分析。
血清和血漿經常用于臨床和藥物蛋白質組學研究，以發現治療靶點的早期診斷生物標志物。這些體液樣本是在非創傷條件下，易于獲得的，它們中會含有一些高濃度的蛋白質，這些高濃度蛋白質會對一些含量較低蛋白的觀察造成影響。在血清生物標志物的研究中，主要問題就是如何消除豐富的高濃度蛋白質，同時發現和富集低豐度的蛋白質。可以大量表達的蛋白質，如白蛋白和IgG，占血清/血漿總蛋白質的70%。相反，蛋白質生物標志物的含量可能要低得多（pg/ml）。高豐度蛋白質會為一維和二維電泳，高效液相色譜和質譜等分析程序帶來困難，因為它們在研究中，會掩蓋那些表達量較小的 目標蛋白質。必須有效，可重復地從血液樣本中明確清除掉高豐度蛋白質，才可以正確的檢測低豐度蛋白質。在進行蛋白質組分析之前，特別是在使用質譜法時，必須從人體樣品（例如血漿，血清，尿液或腦脊液）中選擇性去除白蛋白。
目前常用的白蛋白去除方式為，親和染料配體Cibacron Blue F3GA共價鍵合到市售載體上，用于從水溶液和人血漿中吸附HSA，但這種清除方式缺乏選擇性。在免疫親和系統中，還會使用抗白蛋白抗體進行白蛋白清除。使用蛋白A用于去除IgG蛋白。這些技術通常具有合理的特異性，但使用成本較高。此外，由于這些清除方式中許多都是基于瓊脂糖樹脂或其衍生柱進行的，因此它們在對濃度較低蛋白進行富集時過程非常耗時，而且無法在短時間內處理大量樣品，并且難以適應自動化系統。同時，使用這些方法去除蛋白質通常需要增加樣品體積來進行實驗，因此需要額外的蛋白質濃縮步驟。為解決上述問題，急需具有極高的效率，均勻性和吞吐量的新白蛋白和IG去除方法。
BcMag ? 快速HSA/IgG清除試劑盒是基于我們獨特的磁珠，經過我們專有的化學修飾，可快速輕松地從血清和血漿樣品中去除白蛋白和IgG。在特定的緩沖條件下，磁珠與樣品中的所有其他蛋白質（白蛋白和IgG除外）結合，允許結合和釋放除白蛋白和IgG以外的所有低濃度的蛋白質。富集和洗脫的蛋白質可用于下游應用，例如蛋白質組分析，生物標志物檢測，酶測定，SELDI分析，蛋白質陣列像素化，1D和2D凝膠電泳，LC/MS和MALDI-TOF MS。
快速HSA/IgG清除試劑盒的工作流程
使用白蛋白去除試劑盒非常簡單。將磁珠與血清或血漿樣品混合，并連續旋轉孵育。在混合過程中，磁珠保持懸浮在樣品溶液中，使樣品中的所有其他蛋白質（白蛋白和IgG除外）與磁珠結合。孵育后，收集磁珠并使用磁力架將其與樣品分離。然后洗脫結合的蛋白質。
特點和優勢
· 快速，簡單，無需色譜柱，離心機或過濾器。
· 去除>95%的IgG和90%的白蛋白。
· 高通量：在不到30分鐘的時間內可快速處理96個樣品
· 低豐度富集等于或優于六肽或抗體
· 溫和的洗脫條件，保留了原蛋白的三級結構，并易于進行到二次分析。
· 根據實驗需求可輕松調整樣本量體積大小和自動化程度
· 最小的樣品稀釋度
· 適用于LC-MS，及基于蛋白質活性的分析和蛋白質組學研究。
協議
注釋
· 以下實驗是一個例子。血清中的蛋白質濃度可能會有所不同。10ul人血清含有約700ug的完整蛋白質。其中約70%將是人血清白蛋白和IgG。每個反應中使用的血清量應由用戶優化。系統過載可能導致白蛋白攜帶到低豐度蛋白質部分。使用給定的方案，用戶應該將洗脫蛋白含量在50-100μg血清蛋白。
· 樣品在含鹽緩沖液中洗脫，可能需要在電泳或質譜分析之前脫鹽。如果樣品在分析前被充分稀釋，則可不需要脫鹽。
所需材料
· BcMag ? 快速HAS- IgG清除磁珠
· 1x結合/洗滌緩沖液：20 mM磷酸鈉，pH 6.5
· 1x洗脫緩沖液：100 mM甘氨酸HCl，pH 2.7
材料準備
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Item |
Source |
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磁力分離器
**根據樣品體積，用戶可以選擇以下磁力分離器之一 |
l BcMag? separator-2 適用于兩個單獨的1.5毫升離心管 (Bioclone, Cat.# MS-01); l BcMag? separator-6 適用于六個單獨的1.5毫升離心管 (Bioclone, Cat.# MS-02); l BcMag? separator-24 適用于24個單獨的1.5-2.0 ml離心管 (Bioclone, Cat.# MS-03); l BcMag? separator-50 適用于1個單獨的50毫升離心管，1個單獨的15毫升離心管, 以及4個 1.5毫升 離心管 (Bioclone,Cat.# MS-04）
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BcMag 96孔磁力分離器 |
l BcMag 96-well Plate Magnetic Separator (side-pull,) 或者 96-well PCR plate 和 96-well microplate, 或其他兼容的磁力分離器(Blioclone, Cat#: MS-06) |
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可調單通道和多通道移液器 |
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擺動離心機 |
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如果使用96孔PCR板/管，則需要添加項目 |
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渦懸混合器 **用戶還可以使用其他型號的渦懸混合器。但是，時間和速度應進行優化，并且混合器應滿足: 扭矩 ≥1.5 mm-4 mm, 轉速 ≥ 2000 rpm |
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Eppendorf? MixMate? |
Eppendorf, Cat#:5353000529 |
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Tube Holder PCR 96 |
Eppendorf, Cat#: 022674005 |
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Tube Holder 1.5/2.0 mL, for 24?×?1.5 mL or 2.0 mL |
Eppendorf, Cat#: 022674048 |
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Smart Mixer, Multi Shaker |
BenchTop Lab Systems, Cat#:5353000529 |
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1.5/2.0 mL 離心管 |
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96孔PCR板或者 8孔 PCR 管 |
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PCR 板/管 ** IMPORTANT! 如果使用其他管或PCR板，確保PCR管或PCR板錐形部分底部的井徑必須≥2.5毫米。 |
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程序
注意：
l 震動試劑瓶，使磁珠重新懸浮，直到完全均勻。
· 分液時，不要讓磁珠靜置超過5分鐘。
1.將40μl磁珠轉移到新管或新的96孔PCR板，微孔板或0.2ml PCR管中，并添加50μl結合緩沖液至最終90μl反應體積。
2. 加入10μl血清樣品，通過緩慢上下移液20-25次將樣品與磁珠混合，或以2000 rpm的轉速渦旋樣品5min（見圖）。
3. 將樣品板/管放在磁力架上30s或直到溶液澄清。
4. 棄去上清液，同時樣品板保留在磁力架上。
5. 通過緩慢上下移液20-25次，用100μL結合緩沖液洗滌磁珠，或以2000 rpm的轉速渦旋樣品2min。將樣品板/管放在磁力架上30s或直到溶液澄清。
6. 重復步驟5一次
7. 將磁珠重懸于50-100μl洗脫緩沖液中，并通過緩慢上下移液20-25次將樣品與磁珠混合，或以2000 rpm渦旋樣品5分鐘。
8. 將上清液轉移到新的微量離心管或微量滴定板中。含有目標蛋白質的上清液純化完成，可用于下游應用。
