產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
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貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
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MG101 |
BcMag? GST-標(biāo)簽蛋白純化試劑盒
2 ml BcMag? Glutathione magnetic beads |
Each |
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MG102 |
BcMag? GST-標(biāo)簽蛋白純化磁珠 |
5 ml |
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MG103 |
BcMag? GST-標(biāo)簽蛋白純化磁珠 |
10 ml |
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產(chǎn)品屬性 |
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組成 |
連接有高密度谷胱甘肽的磁珠 |
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磁力大小 |
~60 EMU/g |
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磁化類型 |
超順磁性 |
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有效密度 |
2.5 g/ml |
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濃度 |
50 mg/ml (1x PBS) |
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結(jié)合能力 |
>2mg GST /ml 磁珠 |
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儲存 |
儲存在 4°C |
運(yùn)輸條件: 常溫運(yùn)輸
儲存條件: 在4oC儲存試劑盒.
簡介
BcMag? GST-Tagged protein purification magnetic beads是將高密度谷胱甘肽共價連接到磁性微球上。該微球結(jié)合了親和蛋白純化的所有優(yōu)點（成本低、操作簡單、高特異性和大容量）和磁性，在使用手動操作或自動化快速高通量純化操作過程都適用。它是專門設(shè)計用于從各種類型樣品中捕獲和純化GST標(biāo)記的蛋白質(zhì)的一款磁珠產(chǎn)品。
工作流程
用磁性微粒進(jìn)行蛋白純化的操作過程非常簡單（圖1）。只需要將磁性微粒與細(xì)胞裂解物混合，并連續(xù)旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)足夠時間。在混合過程中，保持磁珠懸浮在樣品溶液中，使GST標(biāo)簽的蛋白質(zhì)與被固定的配體充分結(jié)合。孵育后，收集磁珠，并使用磁力分離器將磁珠從樣品中分離。然后，用過量的還原型谷胱甘肽洗脫下純化后的GST標(biāo)簽的重組蛋白。
優(yōu)勢及特點
l 快捷，簡單的一步法高通量操作;無需純化柱或過濾器，或重復(fù)移液、離心等操作。
l 穩(wěn)定的共價鍵，最少的配體泄漏
l 極高結(jié)合能力，非常低的非特異性結(jié)合率
l 可根據(jù)實驗條件對樣品體積進(jìn)行調(diào)整，便于自動化操作
l 產(chǎn)品重復(fù)效果好
產(chǎn)品應(yīng)用
l 研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能
l X射線晶體學(xué)的重組蛋白的制備
l 是研究蛋白質(zhì)，與蛋白質(zhì)或DNA相互作用的理想選擇材料
l 在免疫研究中，提高抗體與對應(yīng)蛋白的結(jié)合和能力
l 即使使用粗細(xì)胞裂解液，也能有效篩選出表達(dá)的蛋白質(zhì)
l GST標(biāo)簽蛋白的微量純化
背景信息
谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶（GST）是一種高度可溶和穩(wěn)定的，26kDa大小的蛋白酶，可以對谷胱甘肽（GSH）的保護(hù)機(jī)制進(jìn)行催化作用。許多真核蛋白質(zhì)在原核表達(dá)系統(tǒng)（如大腸桿菌）中表達(dá)時，是以包涵體（不溶性聚集蛋白）的形式產(chǎn)生的，包涵體是一種由錯誤折疊引起的故障蛋白質(zhì)聚合體。將包涵體蛋白重新折疊成為功能蛋白通常是非常困難的。GST蛋白也因為其本身的高穩(wěn)定性和高溶解度被廣泛用作融合伙伴，用來促進(jìn)目標(biāo)蛋白質(zhì)的更大量表達(dá)和溶解。此外，GST蛋白對其天然底物還原型谷胱甘肽還有很高的親和力。因此，GST作為親和標(biāo)簽成為原核表達(dá)系統(tǒng)中活性重組產(chǎn)物單步純化的最常用工具。
谷胱甘肽是一種短肽（Glu-Cys-Gly），它對谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶（GST）具有高度親和力。當(dāng)將谷胱甘肽固定在色譜基質(zhì)（如珠狀瓊脂糖或磁珠）中時，基質(zhì)可以通過親和作用精確捕獲GST標(biāo)記的蛋白質(zhì)。通過將編碼目標(biāo)蛋白質(zhì)的DNA序列插入到表達(dá)載體中，GST標(biāo)簽可以與蛋白質(zhì)的C末端或N末端融合。如果需要，可以通過位點特異性蛋白酶將感興趣的蛋白質(zhì)從GST標(biāo)簽上切割下來。蛋白酶位點可以設(shè)計在GST標(biāo)簽和目標(biāo)蛋白質(zhì)之間的連接肽鏈部分。
目前，谷胱甘肽的純化方式主要是固定在傳統(tǒng)的親和層析基質(zhì)上，如瓊脂糖樹脂或純化柱。使用這些固體基質(zhì)作為材料進(jìn)行蛋白純化，純化過程非常繁瑣、耗時，且無法處理體積非常微小的樣品，并且難以適應(yīng)自動化系統(tǒng)。Bioclone研發(fā)了一種高效的基于磁珠的GST標(biāo)簽蛋白質(zhì)純化系統(tǒng)來克服這些問題。
General references
· Frangioni, J.V. and Neel, B.G. (1993). Solubilization and purification of enzymatically active glutathione s-transferase (pGEX) fusion proteins. Anal Biochem 210:179-87.
· Simons, P.C. and VanderJagt, D.L. (1977). Purification of glutathione S-transferases for human liver by glutathione-affinity chromatography. Anal Biochem 82:334-41.
